蝎毒治疗癫痫理论的相关研究

研究蝎毒治疗癫痫之前必须先获得癫痫模型,常用的方法是用红藻酸(Kainic acid,KA)作用于模型组大鼠,再与正常对照组比较.分别采用高效液相色谱分析的方法测定两组大鼠额叶皮层、杏仁核和海马中神经递质Glu 的含量.结果显示癫痫模型组大鼠上述脑区的Glu 的含量均明显高于正常对照组(P<0.01).KA 癫痫大鼠模型的建立与神经递质Glu密切相关.蝎毒产品

全蝎的主要活性成分为蝎毒(Buthotoxin),是一种类似蛇毒神经毒的多肽物质,也是全蝎抗癫痫的主要有效部分.人们采用Shim-Pack WCX-1 型阳离子交换高压色谱柱对中国东亚钳蝎全蝎毒进行了分离,先后提取出了诸如抗癫痫活性的多肽(AEP),镇痛活性多肽如蝎毒素-Ⅲ,透明质酸酶等物质.在鉴定了其中的抗癫痫肽、镇痛肽和抗肿瘤肽活性峰的基础上, 应用Shim-Pack DIOL-300 型凝胶排阻高压色谱柱对它们进行了进一步分离和鉴定, 可以得到较纯的3 种多肽.在高压色谱所提供的全蝎毒分离信息的基础上,应用与Shim-Pack WCX-1 色谱柱具有相同交换基团的、具有较大吸附容量的CM Sepharose CL-6B 软胶介质在低压色谱上对全蝎毒进行了分离,并对其中的抗癫痫肽进行了鉴定.如今已证实抗癫痫活性多肽(AEP)具有良好的抗癫痫作用.为了获得更好更纯的AEP,人们利用基因工程方法表达抗癫痫肽(AEP)串联体蛋白,并进行纯化、鉴定.先用PCR 扩增AEP 及AEp-His 基因片段,并分别克隆至测序载体中.测序正确后,用基因重组技术获得二串体基因,构建毕赤酵母表达载体pPIC9K-AEP2-His,甲醇诱导AEP2-His 在毕赤酵母中表达,用Ni-chelating Sepharose FF 柱纯化表达的融合蛋白, 并用抗His 单克隆抗体进行Western blot 鉴定.结果表明,构建了AEP 二串体酵母表达载体,获得了纯化的AEP2-His 蛋白,其相对分子质量约20 000.其他提纯蝎毒抗癫痫多肽的方法还有如抗癫痫肽/GST 融合表达及包涵体蛋白复性纯化等.

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