蝎毒对家兔凝血功能影响的研究
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蝎毒存在于蝎尾部毒腺内,是一类具有多种生物活性的蛋白质或多肽的混合物。蝎毒具有广泛的药理学作用,如抗肿瘤、抗风湿、抗癫痫等作用。为探讨蝎毒对凝血功能的影响,本研究检测蝎毒对家兔凝血酶原、部分凝血酶原时间、血小板计数的影响。
1 材料与方法
1.1 材料:实验所用的蝎毒为野生蝎提取物,野生蝎捕捉于海南省东方市。家兔为普通家兔,由广东医学院动物实验中心提供,2.0±0.1Kg。
1.2 方法
1.2.1 蝎毒的提取:用电刺激活蝎腹部,用吸管收集从尾尖排出的蝎毒。将10ul蝎毒加入100ul任氏液配制成蝎毒液,置于4℃冰箱中冷存备用。
1.2.2 实验方法:将10只家兔分别在用药前1h,用药后1h、2h从耳缘静脉采血1.8ml,肝素抗凝,轻摇使血液与抗凝剂充分混匀,立即送检。采用美国产欧加农四通道血凝测仪检测凝血酶原时间(PT)、部分酶原时间(APTT)、纤维蛋白原(FIB),所得数据采用t检验。
2 结果
本组实验动物中的PT、APTT值在用药后1小时最长,FIB含量也在用药后1h最少。用药后1hPT、APTT、FIB与用药前相比有差异显著性;用药后2h PT、APTT、FIB与用药前相比无显著性差异,结果见表1。
表1 蝎毒对PT、APTT、FIB的影响(略)
3 讨论
蝎毒为蝎尾毒囊中排泌出来的一种有毒分泌物,蝎毒中大部分是具有药理学活性的蛋白质。蝎毒中已经分离出来约30种蝎毒素,主要是由50~70个氨基酸所组成的短肽,分子量约在6300~9000D之间,蝎毒对热较稳定。在我国中医临床验证及理论体系的指导下,蝎毒在抗肿瘤、抗癫痫、抗风湿、治疗心血管疾病等方面取得了丰硕的成果。此外,蝎毒对凝血功能还具有抑制作用,本实验即基于对凝血功能的抑制进行探讨蝎毒对PT、APTT、FIB的影响。
3.1 蝎毒的采集:蝎毒的采集方法很多,常见的方法有剪尾提毒法、机械刺激采毒法、电刺激采集法等,本组采用的是电刺激采毒法。所用的野生蝎是在4月至5月捕捉到的,此时的蝎刚刚度过较长的冬眠期,蝎毒有效成分含量较高,为实验提供了有利的条件。
3.2 PT、APTT、FIB的临床意义:由于过去衡量凝血功能的出血、凝血时间对轻度或中度凝血功能障碍不能检出,特别是血友病甲、乙患者在血常规中难以发现,大大增加了病人在手术中出血的风险。传统的玻片法、毛细血管法检测凝血时间也不能对血液的高凝状态作出判断,以致不能提醒医生对DIC和血栓形成的警惕。本试验选择的凝血指标中凝血酶原时间测定是外源性凝血系统的过筛试验,部分凝血酶原时间为内源性凝血系统的筛选试验。有文献报道[1]如果凝血酶原时间、部分凝血酶原时间、纤维蛋白原正常,即可排除凝血因子缺乏,所以凝血酶原时间、部分凝血酶原时间、纤维蛋白原是有效衡量凝血因子缺乏的指标。近年来,国内也对手术前PT、APTT、FIB检查非常重视,卫生部已在2000年颁布停止出凝血时间测定而由PT、APTT、FIB代替的规定。
3.3 本实验分别在给药前1h、给药后1h、2h抽血1.8ml,并且经过抗凝,在抽血后2h及时进行检测[2],所以全组未出现溶血。本实验中测定的凝血酶原时间、部分凝血酶原时间,在给药1h明显延长,与给药前相比具有差异显著性。在给药2h凝血酶原时间、部分凝血酶原时间比1h缩短,与给药前相比无差异显著性。实验中所测得的纤维蛋白原含量在给药后1h最少,在给药后2h含量比1h测得值高。1h测得的纤维蛋白原与给药前相比有差异显著性,2h测得值与给药前相比无差异显著性。从本实验结果来看,本实验中测得的凝血酶原时间、部分凝血酶原时间和纤维蛋白原均在给药后1h达到变化高峰,从而证实蝎毒对家兔的凝血功能确实有抑制作用。国内有报道[3]认为蝎毒活性肽是蝎毒中具有抗栓溶栓作用的主要成分,并用蝎毒活性肽对兔血液流变性影响的研究提示蝎毒活性肽是通过降低血小板和红细胞聚集、降低FIB从而使血液粘度降低达到抗栓溶栓作用。本试验中所用蝎毒未经过提纯,包含了蝎毒活性肽成分,本试验中蝎毒对家兔凝血功能的抑制可能与文献报道的一致。另外,由于凝血酶原时间、部分凝血酶原时间和纤维蛋白原是凝血因子的筛选实验,蝎毒对家兔凝血功能的影响也可能是蝎毒影响了凝血因子的功能所致。
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